Set Of Equipments and Technology

Địa chỉ: Số 45 ngõ 55 phố Nguyễn Ngọc Nại, phường Khương Mai, quận Thanh Xuân, TP. Hà Nội, ĐT: 04. 22412787 / 35401882 / 66552265 ; Fax: 04. 35149844 ; Email: vinasets@vnn.vn

Các câu hỏi thường gặp về kỹ thuật LAMP

Các câu hỏi thường gặp về kỹ thuật LAMP

Giá bán : Liên hệ

download


        Hiện nay trên thế giới đang phát triển các phương pháp chuẩn đoán nhanh bệnh học bằng phương pháp sinh học phân tử. Một trong các kỹ thuật mới nhất hiện nay được gọi là Kỹ thuật LAMP ( hay phương pháp LAMP ) để chuẩn đoán xác định nhanh các tác nhân gây bệnh trong khoảng 30 phút tại hiện trường với độ nhạy và đặc hiệu rất cao do sử dụng từ 4 đến 6 mồi. Kỹ thuật này được các nhà khoa học Nhật Bản phát minh ra và được công ty Eiken Chemical Nhật Bản đăng ký bản quyền và nhượng quyền công nghệ cho Optigene – Anh Quốc nghiên cứu và sản xuất Thiết bị, hóa chất và tiêu hao cho kỹ thuật LAMP này.

        "LAMP” (Loop-mediated Isothermal Amplification) là phương pháp khuếch đại nucleic acid đơn giản, nhanh chóng và tiết kiệm. Sử dụng 4 hoặc 6 mồi khác nhau được thiết kế đặc biệt nhận ra 6 đoạn riêng biệt trên gen đích (target gene) và quá trình phản ứng xảy ra ở nhiệt độ cố định dùng phản ứng thay thế mạch. Khuếch đại và phát hiện gene có thể được hoàn thành chỉ trong 1 bước, bằng cách ủ hỗn hợp mẫu, primers, DNA polymerase có hoạt tính thay thế mạch và chất nền ở nhiệt độ cố định (khoảng 65°C). Phương pháp này cho hiệu quả khuếch đại cao với lượng DNA được khuếch đại đến 109-1010 lần trong vòng 15-60 phút. Bởi vì tính đặc hiệu cao. Sự hiện diện của sản phẩm khuếch đại có thể chứng tỏ sự có mặt của đoạn gene quan tâm.

        Do là kỹ thuật mới lên có rất nhiều thắc mắc các nhà khoa học quan tâm.

1. Thiết bị Genie II và Genie III có thể hoạt động trong thời gian bao lâu bằng pin ?

Các thiết bị này có thể hoạt động 1 ngày bằng Pin sạc có sẵn

2. Thời gian sạc pin cho thiết bị là bao lâu ?

Thời gian cần thiết để sạc đầy pin khoảng 3 tiếng

3. Ta có thể sử dụng 2 block độc lập trên Genie II ?

Vâng, chúng ta có thể sử dụng 2 block độc lập với 2 protocol khác nhau, với thời điểm bắt đầu và kết thúc khác nhau

4. Chúng ta có thể sử dụng ống PCR tiêu chuẩn cho thiết bị Genie II và Genie III không ?

Genie II và Genie III sử dụng strips riêng với hệ thống khóa nắp đậy và tối ưu hóa cho hệ thống quang học và nhiệt. Do vậy mà các loại ống khác không sử dụng được.

5. Khoảng nhiệt độ làm việc của Genie II và Genie III ?

Khoảng nhiệt độ điều khiển của thiết bị từ 40oC – 99oC

6. Làm thế nào chúng ta có thể cập nhật phần mềm và firmware ?

Phần mềm và firmware luôn có sẵn trên Website của chúng tôi và bạn có thể dễ dàng update, bằng cách sử dụng chức năng update funtion trên thiết bị.

7. Thuốc nhuộm nào có thể sử dụng cho Genie II và Genie III ?

Genie II có thể phát hiện các thuốc nhuộm có bước sóng kích thích màu xanh với bước sóng phát xạ trên 510nm.

Genie III sử dụng 2 kênh mầu huỳnh quang :

Kênh 1 : bước sóng kích thích 470nm và phát xạ trong dải 510 – 550nm

Kênh 2 : bước sóng kích thích 590nm và phát xạ > 620nm

8. Chúng ta có thể sử dụng kỹ thuật LAMP cho những ứng dụng nào ?

Hầu hết các ứng dụng khuếch đại đẳng nhiệt hoặc tương tự có thể sử dụng trên hệ thống Genie II và Genie III như RPA, NASBA, SMAP và BART đã chạy thành công.

9. Làm thế nào tôi có thể thiết kế mồi cho LAMP ?

LAMP sử dụng 6 mồi với 8 đoạn đặc hiệu. Chúng tôi phát triển phần mềm thiết kế mồi LAMP Designer cung cấp một giải pháp thiết kế dễ dàng và nhanh chóng các mồi LAMP.

10. Mồi của LAMP có cần sử dụng phương pháp tinh sạch đặt biệt nào không ?

Không, bạn chỉ cần sử dụng phương pháp loại muối thông thường

11. Tôi có cần phải thực hiện bước tiền gia nhiệt (Preheat) trước khi chạy phản ứng ?

Đó không phải là bắt buộc cần phải có bước preheat ở 95oC trước khi chạy phản ứng, tuy nhiên có thể nếu protocol yêu cầu.

12. Những gì có trong Master mix ?

Optigene cung cấp master mix với Enzym độc quyền, cùng Mg và bộ đệm và các thành phần chính xác cho phép người sử dụng dễ dàng làm việc và cho kết quả tốt nhất. Bạn chỉ cần thêm mồi và ADN khuôn vào Mastermix là bạn có thể chạy.

13. Đâu là sự khác biệt giữa LAMP và PCR ?

PCR dựa vào chu kỳ nhiệt để tạo ra ADN sợi đôi. LAMP sử dụng Enzym chức năng chuyển sợi khác với PCR nhằm tạo ra chuỗi ADN liên tục ở một nhiệt độ cố định.

14. LAMP làm việc như thế nào ?

LAMP là một kỹ thuật khuếch đại Acid nuclenic đặc hiệu độ nhạy cao do sử dụng từ 4 đến 6 mồi. ( chi tiết ở phần giới thiệu về LAMP)

15. Chuẩn bị ADN khuôn như thế nào ?

Để đảm bảo độ đặc hiệu và độ nhạy cao. Chúng tôi khuyến cáo nên tinh sạch DNA khuôn. Các Enzym được cung cấp bởi Optigene ít nhạy cảm với các chất ức chế như enzym PCR (Taq) do vậy mà chỉ cần lượng nhỏ khuôn đã có thể chạy phản ứng LAMP.

16. Ai có thể sử dụng được Genie ?

Các thiết bị Genie II và Genie III được thiết kế cho bất cứ ai sử dụng chỉ với hướng dẫn cơ bản. Các cài đặt phản ứng đơn giản dễ dàng trên màn hình cảm ứng cũng như kết quả được hiển thị ngay trên màn hình theo thời gian thực.

17. Làm thế nào để tôi có thể thiết kế được mồi thích hợp ?

Vấn đề này chúng tôi khuyên bạn nên dùng phần mềm thiết kế mồi LAMP Designer của Optigene.

18. Tôi có cần chạy phản ứng đối chứng (chứng âm và chứng dương) ?

Chúng tôi khuyên bạn nên chạy chứng âm và chứng dương cho tất cả các kỹ thuật phòng thí nghiệm.

19. Tôi phải chuẩn bị những gì để chạy thiết bị Genie ?

Bạn cần có thêm Strips, Pipet, tips, Master mix, Primer, DNA/RNA khuôn, ultrapure water.

20. Một kết quả dương tính nhìn sẽ như thế nào ?

Một kết quả dương tính được khuếch đại có thể nhìn được bằng sự gia tăng huỳnh quang hiển thị bằng đường cong huỳnh quang trên màn hình.

21. Phản ứng LAMP có nhanh không ?

ADN đích được khuêch đại phụ thuộc một số yếu tố bao gồm : thiết kế mồi, độ tinh sạch và số lượng ADN khuôn đưa vào. Thông thường các Master mix của Optigene cho kết quả trong vòng từ 5 – 30 phút phản ứng.

22. Làm sao tôi có thể khẳng định một phản ứng dương tính ?

Phản ứng LAMP tạo ra bản sao chuỗi di truyền có trình tự cụ thể và duy nhất cho một mục tiêu đó. Do đó có thể khẳng định kết quả là chính xác cho mục tiêu cần tìm. Trong cùng một cách kết quả đúng hay sai rất dễ dàng được phân biệt.

23. Hệ thống Genie II và Genie III có cần kết nối PC ?

Các hệ thống Genie II và Genie III hoạt động độc lập do vậy không cần đến kết nối PC.

24. Tôi có thể sử dụng các hóa chất khác cho hệ thống Genie ?

Genie là hệ thống mở hóa chất. Bạn chỉ cần chọn các thuốc nhuộm có bước sóng phù hợp là được.

25. Tôi có thể sử dụng mồi PCR cho LAMP ?

Điều này là không thể, vì LAMP sử dụng tới 6 mồi đặt hiệu để kích hoạt một phản ứng.

26. Tôi có thể chạy Multiplex với LAMP không ?

Bạn có thể chạy Multiplex, tuy nhiên bạn phải thiết kế mồi.

27. Một phản ứng LAMP cần sử dụng lượng mồi bao nhiêu ?

Với mỗi phản ứng LAMP chúng tôi khuyên bạn nên bổ sung với nồng độ 1.6µM FIP and BIP primers, 0.4µM F3 và B3 primers, 0.8µM LoopF và LoopB.

28. Tôi có thể sử dụng các phản ứng khuếch đại LAMP để định lượng DNA khuôn ?

Không giống như PCR, LAMP không khuếch đại ADN theo cấp số nhân. Do vậy không thể định lượng như PCR hay qPCR

29. Tôi có thể thực hiện phân tích điểm cuối bằng huỳnh quang ?

Tất nhiên bạn có thể thực hiện phân tích điểm cuối trên bản điện di Agarose với các thuốc nhuộm cho DNA như Ethidium Bromide. Tuy nhiên chúng tôi khuyên bạn không nên thực hiện vì lượng ADN từ phản ứng LAMP tạo ra rất lớn lên tới > 20ug và việc mở nắp ống phản ứng có thể gây ô nhiễm DNA ra ngoài và dễ tạo ra lây nhiễm chéo.

30. Nhiệt độ thích hợp để chạy LAMP là bao nhiêu ?

Với các phản ứng LAMP nhiệt độ tối ưu thường là 65oC. Tuy nhiên còn tùy thuộc vào protocol của kít mà bạn sử dụng.

31. Tôi có thể sử dụng sản phẩm của LAMP cho TA cloning không ?

Bạn có thể dùng sản phẩm của phản ứng LAMP để làm TA cloning

32. Độ đặc hiệu của LAMP như thế nào ?

Không giống như PCR chỉ sử dụng 2 mồi, LAMP sử dụng tới 6 mồi với 8 điểm nhận biết khác nhau trên một mục tiêu. Chính vì vậy mà LAMP cho cho độ nhạy và đặc hiệu rất cao.

33. Những gì là ưu điểm của LAMP so với PCR ?

Khuếch đại đẳng nhiệt (LAMP) không cần đến một máy chu trình nhiệt như PCR. Do vậy mà thiết kế nhỏ gọn hơn, nhẹ hơn, và rẻ hơn Real time PCR rất nhiều. LAMP và PCR có độ nhạy tương tự. Tuy nhiên Hóa chất trong hỗn hợp của LAMP mạnh hơn PCR.

34. Cách vệ sinh và khử nhiễm trên hệ thống Genie thế nào ?

Để vệ sinh bên ngoài bạn sử dụng miếng vải ẩm có tẩm dung dịch thuốc tẩy 5% và cẩn thận lau nhẹ nhàng bên ngoài.

Mọi thắc mắc và tư vấn quý khách hàng vui lòng liên hệ :

CÔNG TY CP THIẾT BỊ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM ( VINASETS.,JSC )

VPGD : Lô 2, M5, TT6 Bắc Linh Đàm, Đại Kim, Hoàng Mai, Hà Nội

ĐT : 04. 22413787  /  35401882

Hotline : 0904178586

Website : www.vinasets.com.vn    /    www.kythuatlamp.com

Email : vinasets@vnn.vn  /  duydat@vinasets.com.vn


NHÀ CUNG CẤP

Scroll to top
0904 178 586